Resultados de PGT-A en el Instituto de Fertilidad

Results of PGT-A at the Fertility Institute

Autores:

  • Matías Colabianchi,
  • Ramiro Colabianchi,
  • María Susana Roble,
  • María Eugenia Pérez Audero,
  • Sol Fontela.

Institución: Instituto de Fertilidad Asistida Dr. J. Colabianchi. Rosario, Argentina. info@institutocolabianchi.com

Mail de contacto: ramiro.colabianchi@institutocolabianchi.com

 

PREGUNTA DE ESTUDIO: 

El test genético preimplantatorio para aneuploidías (PGT-A), ¿es una herramienta válida para la selección y transferencia de embriones euploides, logrando mayores tasas de implantación y reduciendo las tasas de aborto?

RESPUESTA: La implementación del PGT-A aumentó la tasa de implantación y redujo la tasa de aborto.

LO QUE YA SE SABE: La transferencia selectiva de embriones euploides mejora los resultados clínicos de los pacientes que realizan Fertilización In Vitro, particularmente en aquellos con riesgo de aneuploidía fetal. Los resultados difieren según la técnica utilizada para la biopsia y el diagnóstico genético.

MATERIALES Y METODOS: Se incluyeron 273 ciclos de PGT-A entre diciembre 2012 y febrero 2019. Las biopsias se realizaron en Día 5, 6 ó 7. Las amplificaciones de DNA se llevaron a cabo en el Laboratorio de Biología Molecular del Instituto de Fertilidad Dr. Julio Colabianchi de Rosario, desde 2012 hasta 2015 por arreglos de hibridación genómica comparativa (array CGH) y luego por secuenciación de nueva generación (NGS). Los resultados fueron analizados de acuerdo a la indicación de PGT-A: (A) Abortos a repetición, (B) Antecedentes genéticos, (C) Edad materna avanzada y (D) Fallas repetidas de FIV/ICSI (Fallas de implantación). En todos los casos se transfirió un embrión euploide en ciclo diferido. Se calcularon tasas de cancelación, euploidia, embarazo clínico y aborto.

RESULTADOS: Se obtuvieron blastocistos para biopsiar en 206 ciclos (75,4%) en ese período de tiempo. Se biopsiaron 548 embriones, resultando euploides el 32,3%, aneuploides un 55,2%, mosaicos un 6,8% y 5,6% resultaron sin diagnóstico. En los grupos con Antecedentes genéticos (B) y Edad materna avanzada (C) la tasa de aneuploidía fue alta (56% y 53,4% respectivamente). La mayor tasa de cancelación de biopsia se presentó en el grupo B (30,6%) y la menor en grupo A (11,5%). La tasa de euploidia fue de 30% en A, C y D y de 21,9% en B. La tasa de embarazo clínico fue más alta en el grupo B (66%) y más baja en el D (41,8%), en relación a los otros grupos. No se registraron abortos en los grupos A y B; la tasa de aborto en el grupo C fue 9,6% y 4,6% en el grupo D.

LIMITACIONES: El poder estadístico de este estudio retrospectivo se limita en el número de casos evaluados y en que se realizó en una sola clínica.

PALABRAS CLAVE: embrión euploide, biopsia embrionaria, blastocisto, secuenciación


SUMMARY
STUDY QUESTION: Is preimplantation genetic test for aneuploidies (PGT-A) a valid tool for the selection of Euploid embryos to transfer, increasing the implantation rate, thus decreasing losses?
ANSWER: The use of the preimplantation study improved implantation rates and reduced abortion rates.
WHAT IS KNOWN ALREADY. Selective transfer of euploid embryos improves the clinical results of patients undergoing In Vitro Fertilization, particularly those at risk of fetal aneuploidy. The results are different depending on the techniques used for biopsy and genetic diagnosis.
DESIGN: Retrospective descriptive study.
MATERIALS AND METHODS: 273 cycles of PGT were included between December 2012 and February 2019. Biopsies were performed on Day 5, 6 or 7. DNA amplifications were done in  Molecular Biology Laboratory of the Dr. Julio Colabianchi Fertility Clinic in Rosario city. Until 2015 by comparative genomic hybridization arrangements and then by new generation sequencing (NGS). Results were analyzed according to the indication of PGT: Repeated Abortions (A), Genetic History (B), Advanced Maternal Age (C) and Repeated IVF / ICSI Failures (D). In a delayed cycle Euploid embryo was transferred. Cancellation, euploidy, pregnancy and abortion rates were calculated.
RESULTS: A total of 206 (75.4%) cycles had embryos with quality to biopsy. 548 embryos were biopsied, resulting in Euploid 32.3%, Aneuploid 55.2%, Mosaic 6.8% and 5.6% without diagnosis. In the groups with a genetic history (B) and advanced maternal age (C), the proportion of cycles that did not obtain Euploid embryos was high (56% and 53.4%). The highest biopsy cancellation rate was found in group B (30.6%) and the lowest in group A (11.5%). The euploidy rate was 30% in A, C and D and 21.9% in B. The clinical pregnancy rate was highest in group B (66%) and lowest in group D (41.8% ), in relation to the other groups. There were no abortions in groups A and B; the abortion rate in group C was 9.6% and 4.6% in group D.
LIMITATIONS: The statistical power of this retrospective study is limited in the number of cases evaluated.
Keywords: euploid embryo, embryo biopsy, blastocyst, sequencing

INTRODUCCIÓN
El Test Genético Preimplantatorio para aneuploidías (PGT-A), llamado anteriormente Screening Genético Preimplantatorio (PGS) comenzó a usarse como herramienta para mejorar las tasas de éxito en los tratamientos de fertilidad en inicio de los ‘90. Inicialmente su utilidad fue cuestionada, pero el advenimiento de nuevas tecnologías permitió mejorar la sensibilidad y especificidad del test, y con ello sus resultados1,2.
Su aplicación se basa en la hipótesis de que la transferencia selectiva de embriones euploides mejora los resultados clínicos de los pacientes que realizan Fertilización In Vitro, particularmente aquellos con riesgo de aneuploidia fetal por cariotipo parental alterado, pacientes con antecedentes de pérdidas recurrentes de embarazos o parejas con fallas de implantación en tratamientos de fertilización asistida de alta complejidad, evitando la transferencia de embriones con riesgo de anomalías cromosómicas, y contribuyendo así a la selección de embriones con mayor potencial de implantación y a la reducción en la tasa de aborto. 
El objetivo del presente estudio es analizar los resultados de pacientes que realizaron PGT-A, de acuerdo a su diagnóstico previo, en el Instituto de Fertilidad Asistida Dr. Julio Colabianchi de la ciudad de Rosario.

MATERIALES Y MÉTODOS: 

DISEÑO: Estudio retrospectivo descriptivo.
Se incluyeron 273 ciclos de PGT-A realizados entre diciembre del 2012 y febrero del 2019. Las células del trofoectodermo fueron biopsiadas en Día 5, 6 o 7 y luego se vitrificaron los blastocistos hasta la transferencia en ciclo diferido. Las amplificaciones de DNA se realizaron en el Laboratorio de Biología Molecular del Instituto de Fertilidad Dr. Julio Colabianchi (SurePlex, Illumina). Hasta el año 2015 el PGT-A se realizó por arreglos de hibridación genómica comparativa (24Sure Cytochip, BlueGnome Illumina) y desde el año 2015 se realizó secuenciación de nueva generación (NGS) (MiSeq, Illumina). Los resultados fueron analizados de acuerdo a la indicación de PGT: abortos a repetición, Edad materna avanzada (considerada en mujeres a partir de los 35 años), Fallas repetidas de FIV/ICSI y Antecedentes genéticos (cuando algún miembro de la pareja era portador de una alteración estructural en su cariotipo, ejemplo translocación balanceada). En todos los casos se transfirió un embrión euploide luego de preparar el endometrio en ciclo diferido y se constató el embarazo clínico por la presencia de latidos cardiacos en saco gestacional por ecografía. Se calcularon también las tasas de abortos

RESULTADOS: 

Un total de 206 (75,4%) ciclos se obtuvieron blastocistos con calidad para realizar la biopsia del trofoectodermo. Se biopsiaron 548 embriones, resultando euploides el 32,3%, aneuploides un 55,2%, mosaicos un 6,8% y 5,6% resultaron sin diagnóstico. No se registraron embarazos múltiples. Los resultados de acuerdo a la indicación del PGT-A se presentan a continuación en la Tabla 1.

Tabla 1. Resultados de los ciclos de PGT de acuerdo a su indicación médica

La media de edad en mujeres con aborto a repetición fue de 35,27 años, obteniéndose un 32% de embriones euploides, y sobre 18 transferencias embrionarias se lograron 12 subunidad BETA positiva (66%), 10 embarazos clínicos (55%) y ningún caso de abortos.

En el grupo definido por antecedentes genéticos, se halló 21,9% de embriones euploides y de un total de 12 transferencias de embrión único 8 subunidad BETA positiva, 8 embarazos clínicos y ninguna interrupción del embarazo. La edad media de este grupo fue de 32,97 años. Cabe destacar que en un 56% de los ciclos no se obtuvieron embriones euploides.
En el grupo cuya indicación fue la Edad materna avanzada, la proporción de ciclos con embriones aneuploides fue alta de un 53,4%. La tasa de embarazo clínico fue 57,6% (30 de 52 transferencias embrionarias) con un 9,6% de abortos.
Finalmente, en el grupo de pacientes con Falla de implantación en ciclos previos, se obtuvieron un 33% de embriones euploides, menor tasa de aneuploidia que los otros grupos (31,7%) y se realizaron 43 transferencias con una tasa de implantación del 51%, tasa de embarazo clínico del  41,8% y tasa de aborto del 4,6%.

DISCUSIÓN 
El éxito de la fertilización in vitro depende, en parte, de la adecuada selección embrionaria. Durante mucho tiempo esta selección se basó sólo en criterios morfológicos3. Una de las causas más frecuentes de falla en implantación e interrupción del embarazo son las anomalías cromosómicas.
De los embriones biopsiados, resultaron euploides el 32,3%, acorde con lo reportado en la literatura4.
En el presente análisis, en el 56% de los ciclos de parejas portadoras de una anomalía cromosómica no se obtuvieron embriones euploides,  aunque la tasa de embarazo clínico en este grupo fue la más alta (66%). 
El grupo de edad materna avanzada tuvo una alta tasa de cancelación debido a pacientes a las que no se le pudo biopsiar ningún embrión y una alta tasa de aneuploidía, mientras que la tasa de embarazo clínico fue similar a la de las mujeres jóvenes de los demás grupos. 
Varios estudios demuestran tasas de natalidad más altas después del PGT-A y la transferencia electiva de un solo embrión, lo que sugiere la posibilidad de que este test disminuya el riesgo de gestaciones múltiples, aunque estos estudios tienen limitaciones importantes.
En nuestro estudio se observó una baja tasa de aborto, lo que sugiere que el PGT-A sería una herramienta útil en este aspecto; y, por otro lado, la transferencia de un embrión único disminuye la incidencia de embarazo múltiple.

CONCLUSIONES
El propósito de cualquier tratamiento de reproducción asistida se dirige a ofrecer la mejor oportunidad para el logro de un recién nacido vivo y sano. 
Los porcentajes hallados en este estudio nos llevan a concluir que la aplicación de PGT-A en las diferentes indicaciones tienen como resultado lo planteado en la hipótesis, mejorar la tasa de implantación y disminuir la tasa de aborto. 
Las diferencias obtenidas por cada indicación de PGT-A nos permiten confirmar que la edad materna avanzada influye negativamente en la calidad cromosómica de los embriones.

REFERENCIAS

  1. Twisk M, Mastenbroek S, van Wely M, Heineman MJ, Van der Veen F, Repping S. Preimplantation genetic screening for abnormal number of chromosomes (aneuploidies) in in vitro fertilisation or intracytoplasmic sperm injection. Cochrane Database Syst Rev. 2006 Jan25;(1):CD005291.
  2. Harper J, Coonen E, De Rycke M, Fiorentino F, Geraedts J, Goossens V, Harton G, Moutou C, Pehlivan Budak T, Renwick P, Sengupta S, Traeger-Synodinos J, Vesela K. What next for preimplantation genetic screening (PGS)? A position statement from the ESHRE PGD Consortium Steering Committee. Reprod. 2010 Apr;25(4):821-3.
  3. López-Rioja MJ, Aguinaga-Ríos M, Sánchez-González CM, Recio-López Y, Zavala- González PN, García-Sánchez R, Chávez-Badiola A. Estudio genético preimplantacional para aneuploidias: resultados de la transición entre diferentes tecnologías. Ginecol Obstet Mex. 2018 febrero;86(2):96-107.
  4. Gianaroli L, Magli MC, Ferraretti AP. The in vivo and in vitro efficiency and efficacy of PGD for aneuploidy. Mol Cell Endocrinol 2001; 183(Suppl 1): p. S13-S18.
  5. Practice Committees of the American Society for Reproductive Medicine and the Society for Assisted Reproductive Technology. The use of preimplantation genetic testing for aneuploidy (PGT-A): a committee opinion. Fertil Steril. 2018 Mar;109(3):429-436.